VacciPharma 2020. V International Congress on Pharmacology of Vaccines

Dear colleagues: The Organizing Committee of the V International Congress on Pharmacology of Vaccines (VacciPharma 2020) organized by the Cuban Society of Pharmacology, BioCubaFarma and the International Union of Basic and Clinical Pharmacology (IUPHAR) would like to invite you to participate in this important event, scheduled for June 14 to 18, 2020 at the Convention Centre of the Melia Marina Varadero Hotel, Varadero Beach, Matanzas, Cuba. The Congress will be formed by different workshops and symposia such as: Meningococcal and Gonococcal vaccines Pneumococcal vaccines Pertussis and combined vaccines Enteric vaccines Leptospira vaccines Viral vaccines Animal models in vaccine development, QC and 3Rs Vaccine technology and bioprocess Vaccine technology transfers Patent, business and international cooperation VacciPharma 2020 is sponsored by: Cuban Society of Pharmacology (SCF) International Union of Basic and Clinical Pharmacology (IUPHAR) Latin-American Association of Pharmacology (ALF) PAHO / WHO BioCubaFarma National research centers: Finlay Vaccine Institute (IFV); Center of Genetic Engineering and Biotechnology (CIGB); Center of Molecular Immunology (CIM); Center for Control of Drugs, Equipment and Medical Devices (CECMED); National Center for Animal and Plant Health (CENSA); Tropical Medicine Institute Pedro Kourí (IPK); National Center for Biopreparations (BioCEN); Center for Drug Research and Development (CIDEM); Center for Clinical Trials (CENCEC); among others International Manufacturers and Companies The key objectives of the Congress are: To provide a progressive state-of-the-art report for scientists, manufacturers, governmental authorities and healthcare workers, who need to be updated about the latest scientific developments for human vaccines, including basic science, product development, market introduction, immunization programs and epidemiological surveillance. To promote the scientific collaboration among experts and institutions through the experience exchange, the presentation of results and the discussion on the conference topics. To accelerate progress in the development of vaccines and the acceptance and introduction of new methods and technologies. Opening lectures, oral presentations and posters will provide you the opportunity to be involved in a high quality congress to discuss about the progress in the field of vaccinology and pharmacology sciences. Deadline for registration and abstract submission: April 15th, 2020 Further information can be found at the VacciPharma 2020 Website: www.immunovaccipharma.com

Reactogenicity of Bordetella pertussis vaccines formulations using aluminum adjuvants in Sprague Dawley rats / Reactogenicidad de formulaciones de vacunas de Bordetella pertussis utilizando adyuvantes de aluminio en ratas Sprague Dawley

Combined vaccines for childhood are a strategy in the prevention of several diseases. These can maximize protection and decrease immunization schedules in children. New candidates are getting closer to being able to meet these needs, but they raise numerous strategic questions related to formulation and regulatory aspects. In addition to being immunogenic and protective must have low reactogenicity when combined with other antigens. Adjuvants are important components in achieving these combinations. Therefore, a reactogenicity study was designed for two Bordetella pertussis formulations containing hydroxide or aluminum phosphate in Sprague Dawley rats. Both formulations dose were administered in 0.2 mL intramuscularly. Clinical evaluations, body weight, water consumption, food, temperature, muscle volume, dermal irritability and pathological studies with special interest at the inoculation site were carried out. Only differences in body temperature and muscle volume were found with a slight increase in values with return to normal. The macroscopic study showed lesions at the site of inoculation, consid­ered characteristics of aluminum adjuvants, such as granulomatous abscesses and the increase in regional lymph nodes near the inoculation site. As conclusion, there are no differences between the formulations of B. pertussis with hydroxide or aluminum phosphate resulted in low reactogenicity.

Las vacunas combinadas resultan una estrategia importante en la obtención de vacunas múltiples para la infancia y el uso de adyuvantes es un componente de gran valor en lograr estas combinaciones, además de ser inmunogénicas y protectoras deben tener baja reactogenicidad, cuando se combinan con diferentes antígenos. Por esta razón, se diseñó un estudio de reactogenicidad a dos formulaciones que contenían hidróxido y fosfato de aluminio con antígenos de Bordetella pertussis en ratas Sprague Dawley. Se administró a cada grupo de ensayo una dosis correspondiente de ambas formulaciones en 0,2 mL por vía intramuscular. Se realizaron observaciones clínicas, comportamiento del peso corporal, consumo de agua, alimentos, temperatura corporal, volumen muscular, irritabilidad dérmica y estudios anatomopatológicos macroscópicos, con especial interés en el sitio de inoculación. No se observaron síntomas, ni muertes en los animales durante el estudio. Tampoco se encontraron diferencias entre los grupos experimentales en cuanto al peso corporal, el consumo de agua y de alimentos; los estudios de temperatura corporal y volumetría muscular evidenciaron un ligero incremento en los valores, los cuales involucionaron rápidamente a la normalidad. En el estudio anatomopatológico macroscópico se observaron lesiones a nivel del punto de inoculación, consideradas propias de los adyuvantes que contienen aluminio, tales como formaciones abscedadas de tipo granulomatosas y el aumento de los ganglios linfáticos regionales cercanos al punto de inoculación. Se concluye que las formulaciones en hidróxido y fosfato de aluminio con antígenos de B.pertussis resultaron ser de baja reactogenicidad.

Condiciones de adsorción de un candidato vacunal basado en vesículas de membrana externa derivada de Salmonella Paratyphi A en adyuvantes de aluminio / Adsorption conditions of a vacunal candidate based on outer membrane vesicles of Salmonella Paratyphi A in aluminum adjuvants

La capacidad inmunoestimuladora de la mayoría de las vacunas es potenciada mediante la adsorción en adyuvantes que contienen aluminio. Variando las condiciones de adsorción (pH, tiempo de adsorción) cambia la cantidad de antígeno adsorbida y por lo tanto la capacidad de estimulación del sistema inmune. El Instituto Finlay de Vacunas investiga un nuevo candidato vacunal basado en vesículas de membrana externa de Salmonella Paratyphi A (VME-SPA). El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones de adsorción de las VME-SPA en dos adyuvantes de sales de aluminio (Al(OH)3 y AlPO4). Para ello, las VME-SPA fueron adsorbidas en ambos adyuvantes bajo diferentes condiciones de pH y tiempo. Mediante la construcción de una Isoterma de Langmuir se determinaron parámetros como la capacidad adsortiva (qm) y el coeficiente de adsorción (Kd). El lote de VME-SPA empleado estaba formado por poblaciones de nanoestructuras con un tamaño de partículas entre 60 y 100 nm. La adsorción de las VME-SPA en ambos adyuvantes, mostró valores ≥95 por ciento a pH neutro (6,5-7,0). Las VME-SPA en presencia de AlPO4 alcanzaron el estado de equilibrio en menor tiempo (99 por ciento a partir de 30 min) en comparación con Al(OH)3 (95 por ciento a partir de 3 h). Las isotermas evaluadas para ambos adyuvantes cumplieron con el modelo de Langmuir (R2≥0,99), con valores de qm y Kd diferentes entre los sistemas de adsorción. El estudio demostró que las VME-SPA se adsorbieron satisfactoriamente en ambos geles, proceso en el que están involucrados diferentes mecanismos de adsorción(AU)

The immunostimulation capacity of most vaccines is enhanced through antigen adsorption on aluminum adjuvants. The changes in adsorption conditions (pH, adsorption time), could change the amount of antigen adsorbed and therefore the ability to stimulate the immune system. The Finlay Institute of Vaccine researches a new vaccine candidate based on outer membrane vesicle from Salmonella Paratyphi A (OMV-SPA). The study aim was to determine adsorption condition of OMV-SPA with two aluminium adjuvants (Al(OH)3 and AlPO4). OMV-SPA was adsorbed in both adjuvants under differences conditions of pH and time. Parameters as adsorptive capacity (qm) and adsorption coefficient (Kd) were determined by construction of Langmuir Isotherm. The lot of OMV-SPA used is composed by population of nanostructure with a particle size between 60 and 100 nm. Adsorption of OMV-SPA in both adjuvants showed values ≥95 percent in neutral pH (6.5-7.0). OMV-SPA with AlPO4 got equilibrium state in less time (99 percent from 30 min) compared with Al(OH)3 (95 percent from 3 h). Isotherms from both adjuvants described Langmuir model (R2≥0.99), with qm and Kd values very different between adsorption systems. As conclusion, the study showed that OMV-SPA was adsorbed satisfactorily in both aluminium adjuvants, process in which are involved different adsorption mechanism(AU)

Influencia del medio de cultivo sobre la cinética de crecimiento y expresión de la proteína recombinante Rv2626c de Mycobacterium tuberculosis H37Rv expresada en Streptomyces lividans TK24 / Influence of the culture medium on the kinetics of growth and expression of the recombinant protein Rv2626c of Mycobacterium tuberculosis H37Rv expressed in Streptomyces lividans TK24

Streptomyces lividans, ha ganado gran atención en los últimos tiempos, como vector de expresión y producción de proteínas de Mycobacterium tuberculosis de interés biomédico, como alternativa a su obtención tradicional en E. coli. La proteína Rv2626c, Proteína de Respuesta Hipóxica 1, es codificada por el gen Rv2626c (hrp1) de M. tuberculosis, perteneciente al regulón de la fase de latencia DosR. Esta proteína se sobre-expresa en la fase de latencia de la tuberculosis bajo condiciones de estrés como hipoxia y bajos niveles, de óxido nítrico. Se ha demostrado la inmunogenicidad y capacidad de esta proteína, de inducir citocinas características del patrón Th-1, tales como el interferón gamma. Por ello, nuestro grupo logró la obtención de Rv2626c por la tecnología del ADN recombinante usando como cepa hospedera Streptomyces lividans TK24. Con el objetivo de aumentar el nivel de expresión de la proteína recombinante, rRv2626c en este trabajo se ensayaron diferentes medios de cultivo, evaluando el crecimiento de la cepa transformada en condiciones de zaranda. Se determinó la cinética de crecimiento en el medio definido, formulado industrialmente en el Centro Nacional de Biopreparados: caldo Triptona Soya (TSB-BioCen) y en medio de cultivo equivalente preparado en el laboratorio. Para establecer la cinética de crecimiento, se utilizó el cálculo del peso seco y la determinación de la concentración de proteínas totales por la técnica de ácido bicinconinico (BCA) a diferentes tiempos del cultivo. Posteriormente, se identificó la proteína clonada mediante SDS-PAGE y Western Blotting, así como los niveles de expresión mediante análisis densitométrico. Los resultados indican que se alcanzaron los máximos niveles de densidad celular a las 36 h de cultivo y los más altos niveles de expresión proteica total y específica entre las 42 y 54 h. Con el medio químicamente definido TSB-Biocen preformulado en lugar del preparado en el laboratorio partiendo de los componentes, se logró reducir el tiempo óptimo para la expresión-secreción de la proteína rv2626c de 96 a 54 h. Los mejores resultados en la promoción de la expresión de la proteína recombinante se lograron con el medio definido TSB-BioCen, a las 48 h con 8,5% de rendimiento específico, superando en más de 10 veces los niveles de crecimiento celular obtenidos con el medio elaborado en el laboratorio y más de dos veces los niveles de secreción de la proteína recombinante(AU)

The use of Streptomyces as a bacterial cell factory for the secretory production of bio-active Mycobacterium tuberculosis proteins have gained a lot of attention in recent years, as a convenient alternative to the traditionally used Escherichia coli. The protein Rv2626c protein, also known as Hypoxic Response Protein 1 (HRP1), is encoded by the gene rv2626c (hrp1) of M. tuberculosis which belongs to the Dormancy Safety Regulator (DosR) regulon. This protein is over-expressed during the latency phase of tuberculosis under stress related conditions such as hypoxia and low, non-toxic, levels of nitric oxide and, the immunogenicity and ability to induce cytokines characteristic of the Th-1 pattern of this protein, such as gamma interferon, have been demonstrated. On this basis, our working group, succeeded in obtaining rRv2626c via recombinant DNA technology using Streptomyces lividans TK24 as the host cell. To improve the expression level of the protein, different culture media were used to evaluate the growth of the transformed strain in shaken flask conditions. Growth kinetic for the recombinant strain was evaluated in defined media of preformulated tryptic soya broth (TSB-Biocen), through the determination of dry weight as well as total protein concentration by Bicinconinic acid assay (BCA). Protein identification was done by SDS-PAGE, Western Blot and its expression level by densitometric analysis. Our results indicated a maximal cell density at 36 h of culture, with higher concentration of total and specific protein at 42-54 h in comparison with previous media used. With the chemically defined media a preformulated TSB-Biocen rather than individual components, culture time for expression/secretion of rRv2626c was reduced from 96 h to 54 h. The best results in expression-secretion levels of rv2626c protein were obtained with the TSB-Biocen defined media at 48 h of culture with 8.5% of specific yield. More than 10 fold increase in cellular growth and more than 2 fold increase in specific yield(AU)

Estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra vesículas de membrana externa de Salmonella Paratyphi A / Standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against outer membrane vesicle of Salmonella Paratyphi A

Salmonella Paratyphi A es un patógeno exclusivo de humanos, siendo la segunda causa más común de fiebre entérica en el sudeste asiático. Recientemente la incidencia en este continente ha aumentado, desplazando a Salmonella entérica serotipo Typhi como la primera causa de fiebre entérica. En la actualidad no existen vacunas licenciadas contra S. Paratyphi A. El Instituto Finlay de Vacunas se encuentra trabajando en la obtención de un candidato vacunal basado en vesículas de membrana externa (VME) contra S. Paratyphi A, por lo que se hizo necesario contar con una técnica para la evaluación de su inmunogenicidad. El objetivo de este trabajo fue la estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra VME de S. Paratyphi A. Para ello, se determinaron las mejores condiciones de este ensayo en cuanto a concentración óptima de recubrimiento y dilución de trabajo del conjugado. Además, se definió el intervalo y linealidad de la curva, la precisión intra e interensayo, la especificidad y el límite de detección. La curva de calibración se generó con un suero estándar interno y presentó un buen ajuste lineal con un R² =0.98. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (=10 por ciento, =20 por ciento respectivamente). Los resultados obtenidos avalan el empleo de este ELISA cuantitativo para la evaluación de la inmunogenicidad de formulaciones de VME de S. Paratyphi A en fases de investigación y desarrollo(AU)

Salmonella Paratyphi A, is an exclusive pathogen of humans, being the second most common cause of enteric fever in Southeast Asia. Recently the incidence of this disease in this continent has increased, displacing Salmonella enterica serotype Typhi as the first cause of enteric fever. Currently there are no vaccines licensed against S. Paratyphi A. The Finlay Institute of Vaccines is working on obtaining a vaccine candidate based on outer membrane vesicles (VME) against S. Paratyphi A, so it became necessary to develop a technique for the evaluation of its immunogenicity. The objective of this work was the standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against VME of S. Paratyphi A. The best conditions of this assay were determined in terms of optimum concentration of coating and working dilution of the conjugate. In addition, the interval and linearity of the curve, the intra- and inter-assay precision, the specificity and the limit of detection were defined. The calibration curve was generated with an internal standard serum and presented a good linear fit with an R² =0.98. The coefficients of variation in the intra- and interassay precision tests were in the intervals established for each one (=10 percent, =20 percent respectively). The results obtained support the use of this quantitative ELISA for the evaluation of the immunogenicity of VME formulations of S. Paratyphi A in research and development phases(AU)